(1)削减分子量(除去非必需区和整合区); (2)削减酶切位点; (3)添加选择标记; (4)引入终止突变
(1)DNA的纯度 (2)DNA甲基化的程度 (3)酶切消化反应的温度 (4)DNA的分子结构 (5)核酸内切限制酶的缓冲液