当两种限制酶反应条件不同时，若要用双酶切，应采取什么措施？为什么？

问答题当两种限制酶反应条件不同时，若要用双酶切，应采取什么措施？为什么？

1.问答题如果用EcoRI酶切DNA时出现星活性，试分析原因？

主要原因有：酶浓度太高；高PH；低盐；含Mn2+、Cu2+等非Mg2+金属离子；甘油浓度高于5%；存在某些有机溶剂。

2.问答题在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（BSA）的目的与机理是什么？

目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切酶失活。

3.填空题限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源（）的限制和对自身DNA的修饰来实现的。

4.填空题甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在（）以下。

5.填空题限制性内切酶通常保存在（）浓度的甘油溶液中。

6.填空题限制酶识别序列为（）个碱基，则其切割频率的理论值应是4n。

7.填空题个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（）。

8.填空题II型限制酶识别位点一般长度为（）个核苷酸对。

9.填空题限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链（）DNA。

10.多项选择题限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（）

A.限制酶去除不完全
B.平端连接
C.核酸外切酶污染
D.连接反应温度低于16℃
E.从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类