填空题

从E.coli中分离到一种hemA突变体，这种突变是不可恢复的，并且需要生长在琥珀酸的平板上才能利用δ-氨基乙酰丙酸合成血红素。希望利用该突变体去克隆E.coli的hemA基因。首先用Sau3A Ⅰ部分酶切E.coli的DNA，得到的DNA片段平均为2kb，然后将这些片段从BamH Ⅰ位点克隆到质粒pBR322中，连接后转化hemA突变体。根据氨苄青霉素抗性来选择重组体。将筛选到的氨苄青霉素抗性克隆重植在加有δ-氨基乙酰丙酸的平板上进行测试。请问：已经测试的Amp^r抗性转化子中有多少不再需要在培养基中添加琥珀酸?(E.coli基因组的全长为4500kb。)（）

答案：多于4000

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打算将一个cDNA克隆到一个表达载体，以便在E.coli中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA的两侧具有BamH Ⅰ的位点，因此计划将它从BamH Ⅰ的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用BamH Ⅰ切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去5'磷酸；接着将处理过的载体同用BamH Ⅰ切割的cDNA片段混合，加入DNA连接酶后进行温育，连接之后，将DNA同已处理过的可以接受DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。
实验中同时设置了四个对照：
对照1：将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照2：将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照3：将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照4：将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落(表Q25.2)。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长(表Q25.2)。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子(表Q25.2)。从实验平板上挑出12个菌落，分离了质粒DNA，并用BamH Ⅰ进行切割，其中9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带，另三个克隆中切出一个cDNA片段，实验终于获得成功。
表Q25.2 cDNA克隆的结果

制备的样品

实验结果

1

2

3

对照1 只有细胞

TMTC

0

0

对照2 未切的载体

TMTC

0

＞1000

对照3 省去磷酸酶处理，无cDNA

TMTC

0

435

对照4 无cDNA

TMTC

0

25

实验样品

TMTC

0

34

注：TMTC=too many to count，多到无法计数。

A.coli中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA的两侧具有BamH
B.2)。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长(表Q25.2)。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子(表Q25.2)。从实验平板上挑出12个菌落，分离了质粒DNA，并用BamH
C.2

单项选择题

红细胞中GSSG转变为GSH时主要的供氢体是( )
A．FADH₂ B．FMNH₂ C．NADH+H⁺
D．NADPH+H⁺ E．H₂O₂

A.FADH₂
B.FMNH₂
C.NADH+H⁺

D.NADPH+H⁺
E.H₂O₂