问答题λYES(酵母—大肠杆菌穿梭载体)是构建 cDNA 文库的高效载体,这种载体是λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成,它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA 被插入载体的质粒部分,然后它能在体外被包装入病毒颗粒中,包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌,λYES中的质粒序列能够被诱导重组出λ基因组,并进行独立复制,这就可以从质粒中分离出来,以便进行进一步的遗传操作。
为了最大限度地提高克隆效率,载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶 XhoI(5’-C十 TCGAG)进行切割,然后在 dTTP 存在的情况下,同 DNA 聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链 cDNA 同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来,这两段寡聚核苷酸的序列是:5’—CGAGATTTACC 和5’—GGTAAATC,它们的 5’端都是磷酸。然后将载体和 cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用 2μg的7载体和 0.1μg 的 cDNA,构建了一个有 4×10 个克隆的 cDNA 文库。载体和cDNA分子要经过怎样的处理才能提高产生重组 DNA分子的效率?
您可能感兴趣的试卷
你可能感兴趣的试题
最新试题
下列对逆转录酶描述正确的是()
题型:单项选择题
TaqDNA聚合酶会在dsDNA的3’末端加上的一个碱基是()
题型:单项选择题
mRNA 消解杂交
题型:名词解释
为了使人类有经济价值的基因在大肠杆菌中高效表达,有时可以采用同步克隆表达受体菌tRNA 基因的方法,其机理是()
题型:单项选择题
决定质粒拷贝数的最主要的因素是()
题型:单项选择题
DNA提取时,使DNA沉淀的物质是()。
题型:单项选择题
基因克隆的受体菌株一般要使用endA 基因发生突变的大肠杆菌菌株,这是为了()。
题型:单项选择题
PCR在循环几次时才会出现两个引物之间的目的片段?()
题型:单项选择题
lacZ’
题型:名词解释
试述T-A 克隆法的原理和用途。
题型:问答题