什么是遗传学检测法?

问答题什么是遗传学检测法?

参考答案： 所谓遗传学检测法(genetic selection)主要是根据受体细胞接受了重组 DNA分子后所发...

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1.问答题在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用 cDNA而不用基因组 DNA？为什么要在cDNA 前加上细菌的启动子？

参考答案：这是因为细菌没有内含子剪接系统，并且不能识别真核生物的启动子之故。

2.问答题RNA与基因组 DNA复性已被广泛用于检测不同类 DNA的转录。DNA驱动的复性实验与RNA驱动的复性实验有何不同？

参考答案：在过量DNA杂交(DNA驱动杂交)实验中，基因组 DNA的复性过程中加入少量的放射性标记 RNA。因...

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3.问答题严紧杂交实验是如何控制的？

参考答案：杂交反应的严紧程度由下面两个因素所决定：温度和盐浓度。强的碱基对才能耐受高的温度，而高的盐浓度使弱的碱基对间的配对变得稳...

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4.问答题用一限制性内切核酸酶切割 Lac⁺Tet^r的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在 lac 基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用 DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化 Lac-Tet^s受体菌，筛选 Tet 转化子，问：Lac^r的基因型是什么？并说明原因。

参考答案：基因型是lac- 原因是在该密码子中插入了两个碱基，造成了移码突变，所以Lac的基因是缺陷的。

5.问答题什么是Western 印迹？它与 Southern 印迹有什么不同？

参考答案：Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上,然后用特异性的抗体进行检测。它与Southern的不...

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6.问答题用 EcoRI和 HindⅢ分别切割同一来源的染色体 DNA，并进行克隆，在前者的克隆中筛选到 A基因，但在后者的克隆中未筛选到 A基因，请说明原因。

参考答案：原因是：HindⅢ的切点在 A基因内。

7.问答题一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉素基因中有识别位点的EcoRI消化。消化物与酵母 DNA 连接后转化对两种抗生素都敏感的 E.coli 菌株。（1）利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞？（2）怎样区分接受了插入酵母 DNA的质粒的克隆？

参考答案：

（1）选择Amp^r的转化子；
（2）所需的克隆是Amp^r和Kan^r。任何能够抗这两种药物的克隆都是自连的非重组质粒。

8.问答题插入失活和插入表达法筛选重组体的主要差别是什么？

参考答案：主要差别是：插入失活法是直接根据失活基因的表型变化来筛选重组体；插入表达是根据一个基因的失活引起另一个基因的表达表型来选...

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9.问答题切口移位（nick translation）标记探针的主要步骤有哪些？

参考答案：（1）DNaseI造成切口；
（2）DNA聚合酶Ⅲ的 5’3’外切核酸酶进行切割；

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10.问答题你在做Southern 印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤是用 NaOH溶液浸泡凝胶，使 DNA变性为单链。为了节省时间，你略过了这一步，直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自显影片是空白。错在哪里？

参考答案：如果你的杂交探针是双链的，可能因为在加入杂交混合物之前忘记将探针变性而得到空白的放射自显影结果。